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[Music] el objetivo general de este procedimiento es preparar grandes proteínas de unión a ADN oligoméricas como mgm 101 utilizando la estrategia de etiquetado con proteína de unión a maltosa o mbp. Esto se logra primero clonando el marco de lectura abierto de mgm 101 aguas abajo de mbp en el vector pmal c2e para expresión en e coli. La proteína de fusión mbp mgm-101 se purifica luego de e coli mediante cromatografía de afinidad de amilopectina. mgm-101 se libera de mbp por escisión proteolítica y se separa de mbp mediante cromatografía de intercambio catiónico. Finalmente, los anillos de mgm-101 se purifican a homogeneidad mediante cromatografía de exclusión por tamaño. En última instancia, aproximadamente 0.8 miligramos de mgm-101 soluble de un litro de cultivo bacteriano se pueden utilizar para la caracterización bioquímica y estructural de esta proteína, que es importante para la reparación del ADN en mitocondrias. La principal ventaja de usar una versión etiquetada de la proteína de unión a motores de mgm 101 es que esta versión es menos tóxica, más soluble y más estable que la versión no etiquetada como un re
