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[Music] en este video te mostraremos cómo preparar una membrana de western blot para la detección quimioluminiscente después de la incubación con anticuerpos y el lavado, la membrana está lista para ser incubada en sustrato quimioluminiscente mejorado o sustrato ECL. Prepara suficiente sustrato ECL para el blot; para una membrana de tamaño mini, usa aproximadamente siete mililitros de sustrato. Aumenta el volumen a 12 mililitros si usas una membrana de tamaño mediano. Estos volúmenes aseguran una cobertura uniforme y resultados óptimos. Cuando se usa muy poco sustrato, es más probable que el buffer de lavado residual afecte negativamente el rendimiento de la enzima peroxidasa de rábano picante. Aunque cualquier recipiente pequeño funcionará para la incubación del sustrato, se recomienda una funda de hoja limpia, ya que reduce el volumen de sustrato necesario. Las fundas de hoja también son económicas y desechables. Incuba durante cinco minutos para asegurar que el sustrato tenga suficiente tiempo para cubrir uniformemente la membrana y desplazar el buffer de lavado. Las membranas también se pueden mantener dentro de una funda de hoja para imágenes.