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la transferencia western fluorescente utiliza anticuerpos secundarios que están conjugados a etiquetas fluorescentes, lo que permite visualizar múltiples proteínas simultáneamente. es una técnica poderosa, ideal para multiplexión y análisis cuantitativo en un amplio rango dinámico. en este experimento necesitarás pipetas, un manípulo de pipeta, buffer de lavado, buffer de bloqueo, anticuerpos primarios y secundarios. para prevenir la unión no específica del anticuerpo, la membrana debe ser bloqueada. hay muchos buffers de bloqueo disponibles; típicamente usamos leche desnatada al tres por ciento diluida en solución salina tamponada con tris y tween 20 o buffer tbst, pero verifica la hoja de datos de tus anticuerpos para la solución óptima. coloca la membrana en una bandeja y cúbrela con buffer de bloqueo. coloca la membrana sobre una plataforma oscilante e incuba durante una hora a temperatura ambiente o toda la noche a cuatro grados Celsius. una ventaja del método de transferencia western fluorescente es la capacidad de detectar dos proteínas objetivo separadas sin despojar la membrana.
